U duttore Sahay, un alumnu di MIT, hè unu di i scientisti principali di u mondu in formulazioni farmaceutiche per vaccini è terapie. Gaurav Sahay hè un prufessore assuciatu in u Dipartimentu di Scienze Farmaceutiche, College of Pharmacy in Oregon State University. U laboratoriu di u duttore Sahay hè sviluppatu novi piattaforme basate in nanotecnologia, cumprese nanoparticelle basate in lipidi per una consegna efficace di terapie di RNA messageria per trattà a fibrosi cistica, a degenerazione di a retina, è contr'à SARS-CoV2. Hà fattu un travagliu pioniere per disseccà u trasportu intracellulare essenziale per a consegna di l'acidu nucleicu à u citosol è hà sviluppatu metudi per superà e barriere endosomiali. Hà più di 48 publicazioni valutate da i pari in riviste di primu livellu, cumprese Science Advances, Nature, Nature Communications, Nature Biotechnology, Nature Nanotechnology, Journal of Controlled Release, Nano Letters, etc.

Hè u vincitore di un 2013 American Association of Pharmaceutical Scientists (AAPS) Postdoctoral Fellow Award, u 2015 Controlled Release Society (CRS) T. Nagai Award, un 2016 American Association of Colleges of Pharmacy (AACP) New Investigator Award, un 2019 Oregon. Università di Salute è Scienze (OHSU) Premiu Distinguished Faculty Senate per a Cullaburazione, 2020 Phi Kappa Phi OSU Emerging Scholar Award è 2020 CMBE Young Innovator Award. Serve cum'è Investigatore Principale nantu à i premii finanziati da l'Istituti Naziunali di Salute, a Fundazione di Fibrosi Cistica, è in u passatu attraversu Moderna Therapeutics, MRF New Investigator è OSU.

U duttore Sahay serve cum'è un cunsultante è un membru di u cunsigliu scientificu per parechje imprese di biotecnologia è di venture capital. Hè statu u presidente di u Simposiu 2018 di NanoMedicine è di Consegna di Drug (NanoDDS, Portland, OR). U duttore Sahay hà finitu a so ricerca postdoctorale cù u prufessore Robert Langer è u prufessore Daniel Anderson à l'Istitutu Koch per a Ricerca Integrativa di Cancer à MIT è hà ricevutu u so Ph.D. da l'Università di Nebraska Medical Center sottu a tutela di u prufessore Alexander Kabanov.

T&T Scientific, Dr. Gaurav Sahay: Nanoparticelle di lipidi per a consegna di mRNA Therapeutics è vaccini 

[00:00:01]

Nima Tamaddoni, PhD

Salute, tutti. Hola, duttore Sahay, ti ringraziu assai per esse unitu è ​​​​u piacè di vedevi di novu dopu, pensu chì trè anni, eramu in Oregon è avemu avutu un piacè di scuntràvi. Pensu chì avemu 170 persone in u lobby è aspittendu più persone. Avà, avemu 20, 25 persone in a stanza. Vuliu avè una introduzione assai breve, cusì ùn ci vole micca un minutu, cusì noi, l'audienza, pudemu piglià u più vantaghju di a vostra cumpetenza, è simu assai umili, veramente umiliati d'avè voi quì. Allora, aghju cuminciatu l'intruduzione, u duttore Sahay hè una di e persone più influenti di u mondu in a vacuna COVID. Hè statu in MIT prima di unisce à l'Università Statale di l'Oregon cum'è prufissore. U so gruppu hà travagliatu cù mRNA, LNP, nanoparticuli di lipidi per anni prima di i vaccini COVID. Hà cuntribuitu significativamente à i vaccini COVID; avemu veramente un piacè di amparà di più; Ùn avete bisognu di più introduzioni, a ghjente vi cunnosci di sicuru quì, è cusì aghju passatu u mic. Grazie di novu per esse quì.

 

[00:01:18]

Dr Gaurav Sahay

Grazie mille, Nima Tamaddoni, PhD. Grazie per questa introduzione assai gentile. Mi ricordu sempre di trè anni fà chì vene in Nano DDS; ùn avemu micca veramente fattu assai in quantu à a vacuna COVID; quelli sò Moderna è Pfizer anu sviluppatu quelli. Avemu travagliatu nantu à u campu, è tandu simu assai entusiasmati per truvà chì sti tecnulugii chì noi è cum'è parechji altri è assai pionieri prima di noi anu travagliatu sò ghjunti à a clinica. Allora, sò veramente assai umiliatu da a vostra introduzione, ma aghju ancu vulsutu correggerà chì, sapete, ùn avemu micca veramente implicatu primarmenti, ma avemu travagliatu in questu campu per un tempu, è simu attenti, è hè un Momentu assai surreale per tutti noi cum'è sti tecnulugii sò, sapete, injected è assai di noi ... È cusì oghje, ciò chì pensu chì era di parlà di sti tecnulugii, quelli nanoparticule liquidi dannu à l'audienza un brevi gustu di quale tipu di sfarenti. tecnulugie esistenu è dopu u nostru travagliu in u campu di a terapia basata in mRNA è induve pensu chì u campu andarà dopu à questu annu di 2020 induve avemu vistu un prugressu cusì rimarchevule. Dunque, i terapii è i vaccini basati in mRNA, in particulare i vaccini, passanu da un campu di rinascimentu à una rivoluzione industriale. Bastamente avemu vistu quantu rapidamente Moderna hà iniziatu u so prucessu clinicu, è dopu, sapete. Inoltre, Pfizer cù BioNTech è Acutas hà cuminciatu à aduprà a tecnulugia.

Avianu sviluppatu per passà in u spaziu assai rapidamente ancu, è tuttu s'hè ghjucatu davanti à u New York Times è eccu alcuni di i ritagli è pensu chì storicamente u 2020 scenderà è cum'è, sapete, annu di rivoluzione è questu. hè un periodu affascinante per, sapete, assai di noi chì travaglianu in u campu di a consegna di droghe di liberazione di cuntrollu è alcuni di l'aspetti chjave cumu pensate à questu in scienze farmaceutiche chì sò, sapete, micca in u campu accademicu guardatu tantu. ma l'industria a guarda assai attentamente. Ma, rende chjaru quantu impurtanti sò questi aspetti. Unu di elli hè cumu spedinu quelli vaccini à minus 80 gradi. Dunque, pensu chì dui uditori ghjovani fora, u campu hà fattu assai cose eccitanti nantu à tecnulugii basati nantu à i lipidi, ma in u fronte industriale ci hè statu ancu assai innuvazione chì hè accaduta, è questu hè una sorta di un mumentu chjave. per rializà, è hè un tempu assai interessante per esse in u campu per cumincià à aduprà certe tecnulugia, alcune di e tecnulugia sviluppate da TNT per formulazioni di nanoparticuli di lipidi, è cusì pensu chì hè un mumentu chjave per i ghjovani scentifichi per esse veramente implicati. è vede l'impattu è questu hè cusì reale perchè à a fine vi sò stati iniettati ancu cù una di queste vaccine è eru, sapete, hà dimustratu quantu sò implicatu cù nanoparticelle lipidiche chì sò veramente sognu di LNP, u tutta a notte, svegliate è tandu era un sognu recurrente.

Allora, pensu chì a realità l'appiccica. Ma passemu da un periodu rinascimentale da 20, sapete, prima di COVID à una sorta di rivoluzione industriale, è spiegheraghju un pocu di più mentre andemu avanti. Allora, pre-COVID, avemu usatu per parlà di ciò chì puderia esse u putenziale di e tecnulugia basate in mRNA. Prima di tuttu, ùn ci hè micca risicu di integrazione genomica quì; ùn hà micca bisognu di entre in u nucleu, hè assai efficau, hà un effettu rapidu, è hè transitori è regulable. Allora, per i vaccini, questu hè l'elementu chjave perchè pensu chì per a terapèutica, avete bisognu di furnisce mRNA per un bellu pezzu, è pensu chì e cumpagnie anu travagliatu nantu à questu; u nostru labburatoriu hà ancu travagliatu annantu à questu per un bellu pezzu, ma hè una sorta di una piccula barra alta perchè duvete cuntinuà à injectà o attraversu altre rotte, furnisce l'RNA di novu è contru è mantene quellu livellu, ma cù una vacuna, hè hè un colpu, sapete, o un trattamentu di dui colpi induve u sistema immune si cura di u restu è tuttu ciò chì avete bisognu hè l'antigenu chì hè furmatu è poi si ne va.

Finu à una applicazione, era una grande applicazione, è prima di COVID, di novu si parlava assai di perchè, sapete, andemu in l'area di vaccinazione in questu campu, perchè e cumpagnie investenu in questu campu, è aghju. pensate chì avà pare più precisu chì ci hè statu assai sforzu fattu in l'industria è in l'accademia per sviluppà alcuni di questi strumenti perchè una volta chì a pandemia hà colpitu, hà aiutatu, si move abbastanza rapidamente. Dunque, assai mudificazioni di mRNA chì sò state pioniere da Drew Wiseman è Katie Crico sò state ancu più travagliatu da industrii cum'è BioNTech è Moderna è assai altri. Allora chì hè diventatu un elementu chjave di mudificazione è chì ci porta ancu à u puntu chì avete bisognu di mudificà un mRNA è avè sequenze selettivi, per esempiu per i vaccini COVID avete avutu sti dui mudificazioni di proline chì sò state introdutte. Dunque assai hè statu fattu in questu sensu. Ma, i sfidi cù sti tecnulugii sò assai caricati negativamente, ùn sò micca capaci di entra in e cellule, è sò assai suscettibili à a degradazione. Allora, l'altru eroe unsung in questa storia hè i nanoparticuli basati in lipidi, questi LNP sò strutture multi-cumpunenti, anu un lipidu ionizable chì interagisce in fondu cù RNA, questu hè l'eroe di a storia, è dopu ci sò attori di sustegnu cum'è u lipidi strutturale, u peg lipid, u colesterolu chì aiutanu à a furmazione di sti lipidi è assai hè statu fattu per capiscenu a struttura, ma ùn sapemu micca esattamente induve sò questi lipidi in e formulazioni.

A speranza o u pensamentu hè chì u lipidu interagisce per via di a so carica pusitiva cù l'RNA, incapsula l'ARN, è dopu u peg lipid aiuta in a circulazione, a stabilità è a furmazione di sti nanoparticuli di lipidi è dopu u colesterolu è i lipidi strutturali cum'è DSPC aiutanu in stabilità cum'è a scappata endosomale è pudete aduprà diversi dispositi cum'è i dispositi microfluidici o i dispositi basati in TNT per furmulà veramente questi LNP. Allora chì hè u scopu principale? Un scopu principale hè di imballà è prutegge, è truverete assai lipidi ionizable chì ponu imballà è prutegge l'acidi nucleici. Ma a sfida è vi parleraghju di questu, ci sò solu pochi chì ponu veramente furnisce stu vivo è pruvucà qualcosa chjamata scappata endosomale è vi parlerà di quessa cum'è andemu avanti. Ci sò più bassi in immunogenicità, l'altra parte veramente fresca di sti particeddi sò a so grande capacità. Cusì, per esempiu, i virus adrenu assuciati ùn ponu micca più di 5 KB di cumpunenti genetichi è assai di sti geni cum'è fibrosi cistica, sò più di 5 KB, alcuni sò cum'è 10 KB in grandezza. Puderanu esse biodegradabili. Avete una capacità di redosing, cusì per l'AAV, avete solu un colpu, unu è fattu, ma cù queste tecnulugii pudete fà una re-amministrazione s'ellu ci hè bisognu è allora ci hè modularità, per quessa chì vogliu dì chì assai carichi diffirenti ponu esse aghjuntu o inclusi in questi LNP.

Per esempiu, u primu SRNA chì hè stata appruvata clinicamente nantu à Patro hè un sistema basatu in LNP, pudete basualmente aduprà i stessi LNP per incapsulà l'ARNm, pudete aghjunghje l'agenti cas9 più croccanti è l'Italia hà avutu un documentu recente chì anu avutu un prucessu clinicu di prima fase induve elli anu datu un cumpunenti cas9 crisper è hà causatu l'editazione di u genu in u fegatu umanu è hà sbattutu sta proteina chjamata TTR, è hè cum'è una è fattu tipu di strategia è infine scalabilità, pensu chì a scalabilità hà una nova definizione avà. Vogliu dì chì questi eranu scalabili, ma avà sò stati scalati per esse, sapete, injected in miliardi di persone è ciò chì face hè chì ci permette in fondu di risolve u prublema di scalabilità. Allora, se capite dumane una nanoparticella lipidica chì pò purtà qualcosa à l'ochju, à u cervellu, à u pulmone, ci hè a capacità di fà veramente miliardi di questu è s'ellu hè un disordine raru, pudete furnisce questi per u a vita di un paziente, sti tipi di tecnulugia. Dunque, pensu chì ciò chì hà fattu hè causatu una rivoluzione industriale per via di a so modularità è a natura scalabile, LNP sorta pò esse usata per diverse modalità è hè pussibule chì, sapete, assai di e diverse malatie seranu guariti per via di sorta. di quantu veloce cose si movenu in a clinica per a vacuna, è cumu queste cose ponu esse facilmente usate per altre tecnulugia chì ponu trattà altre malatie.

Dunque, pensu chì hè un tempu assai interessante per noi. Dunque, l'attori principali in questa storia hè u lipidu ionizable, questi sò a versione precedente DLN-MC3-DMA hè appruvata per a consegna di siRNA, ci sò sistemi basati in lipidiodi è dopu ci sò i lipidi di a prossima generazione chì sò stati sviluppati per furnisce tecnulugie basate in mRNA. . Dunque, u primu pruduttu chì hè statu appruvatu in u 2018 hè Onpattro, utilizendu dinò un lipidu ionizable MC3 in un LNP per furnisce contr'à siRNA, contr'à u TTR è questu era una amministrazione IV. Per i vaccini mRNA, avemu una forma sfarente di lipidi, dunque si guardate quì, questi sò i lipidi ionizabili quì chì sò publicati avà. E, sapete, sò assai simili in natura, ci hè una diffarenza in u lipidu peg, ci hè una ligera differenza in i lipidi ionizabili ancu. À a fine di u ghjornu, pensu chì u corpu, una volta chì dà un mRNA chì in realtà face una proteina spike, vede una sorta di un pruduttu simili cù cumpunenti di dosi differenti è ligeri differenze in u peg è u lipidu ionizable è cusì, l'altru. L'aspettu hè cumu si fabbricanu sti vaccini, simu in fondu à a scala di u laboratoriu, fate tutti questi prucessi, ma ciò chì vogliu dì da questa diapositiva hè chì, sapete, da fà l'ADN puru, dopu à linearizà, dopu cresce. in i batteri, tutti bisognu di fabricazione in scala GMP, è pensu chì avete messu un prugramma maravigliu, è e prossime sessioni avete da amparà da i dirigenti core in questu campu. Ma ciò chì vogliu dì quì hè chì hè pussibule chì queste cose, da quì à 20 anni o ancu da quì à cinque anni, diceranu chì questu era un modu primitivu di fabricazione di sti mRNA è di sti vaccini è perchè allora avete da imballà in cum'è sti cumpunenti di lipidi è chì una sorta di hè ancu un passu di limitazione di u tassu quandu avete principiatu à preparalli.

Dunque, pensu chì ci hè assai da fà ancu in u spaziu di fabricazione di vaccini induve questu puderia esse un modu veloce assai più veloce è assai innovazioni saranu ancu in questu spaziu è cum'è aghju dettu prima, sapete. , Questu hè statu un sforzu glubale, questu era novu nantu à e prime pagine di u New York Times di cumu Pfizer face sti vaccini in diversi lochi. Dunque, una volta chì avete u lipidu currettu, è se pudete fà u trasportu à altri siti allora di colpu averete a pussibilità di trattà parechje altre malatie. Allora, una volta chì i vaccini sò fatti, sò poi injected intramuscularly, andonu in i celluli musculari, à a regione limfoide è in l'antigenu chì presentanu e cellule induve l'antigenu, in questu casu, a proteina spike cù sti dui mudificazione pre-proline hè fatta. è allora chì attiva diversi tipi di risposta immune è di novu, ùn sò micca un espertu di immunologia, ma questu ti dà un gustu di cumu l'attività di consegna à pupulazioni immune selective è u musculu si verifica, chì porta ancu à una risposta chì à un prucessu clinicu hè statu maravigghiusu, ci hè stata una efficacità di 95 per centu di sti vaccini cù, sapete, tutti imballate, cum'è aghju dettu prima cù nanoparticuli basati in lipidi è avè mRNA cù sti dui mudificazione pre-proline.

Allora induve andemu dopu ? Pensu chì hè grande avà pudemu chjappà a populazione immune; avemu una droga siRNA chì pò chjappà u fegato dopu una consegna intramuscular. Ma pensu chì induve u campu à u livellu di l'accademia è poi potenzalmentu à u livellu di l'industrii, u muvimentu hè in u regnu di epatica extra. Parlaraghju un pocu di u nostru travagliu in u spaziu di u pulmone è di l'ochju, ma assai persone sò travagliendu in u spaziu di u cervellu di cunsegna localizata è cusì ognunu di sti organi, se simu capaci di mira à sti particeddi tissuti è cellule selettivamente. , Pensu chì apreria assai di novi spazii è aghju dettu prima chì avemu digià curatu una sorta di ... cum'è un campu hè stata cura di i prublemi di fabricazione. Allora, pensu chì i prossimi passi sò allora in linea è chì ponu esse trasformative. Allora, avemu principiatu cù prima capisci comu sti nanoparticles lipidi u travagliu, cusì tù pigliate tutti issi cumpunenti, mischjà in un in un dispusitivu, furmari sti nanoparticules liquidu bellu cerca. Una volta chì li iniettate IV, u peg lipid di questi LNP cade in una sorta, è ci hè una proteina in u cinema chjamata ApoE, chì a proteina si lega à a superficia di e nanoparticule di lipidi chì poi hè pigliatu in l'epatociti da u receptore LDL. .

U receptore LDL poi l'internalizza, a particella si move in un endosoma precoce, induve cumencia à disintegrate è dopu u lipidu ionizable chì hè pusitivu in carica interagisce cù queste membrane endosomiali è vede una liberazione è unu di i prublemi chjave per a tecnulugia hè. chì a scappata hè relativamente bassu ancu s'è queste cose sò in clinica è sò materiali assai potenti. Ma pensu chì pudemu fà megliu è per quessa scenderà considerablemente i costi di fabricazione ligati à questu. Se simu capaci di fà particelle chì anu una megliu efficienza di scappata, a scappata basatu in mRNA pensu chì hè intornu à u 15 per centu è ciò chì avemu trovu quandu era un postdoc à MIT chì sti particeddi sò ancu riciclati fora è ci hè un trasportatore di colesterolu chjamatu. Neman pig type C unu chì reflux alcune di sti particelle fora di e cellule. Allora, sapete, cusì da u 2015, in avanti finu à u 2019 avemu avutu a pussibilità di travaglià cù Moderna è ciò chì avemu fattu quì era chì basamente avemu utilizatu diversi derivati ​​di u colesterolu, perchè sti nanoparticuli di lipidi anu un cumpunente di colesterol, è aghju dettu prima. Ci hè un trasportatore di colesterolu chì ricicla queste particelle, ipotisemu chì hè pussibule chì l'usu di u colesterolu, per quessa, rimpiazzà u colesterolu cù i so derivati ​​pruvucarà una migliione in a trasfezzione di geni basatu in mRNA. Allora, raggruppemu sti derivati ​​di u colesterolu basatu annantu à a struttura di u colesterolu.

Allora, alcuni di elli ùn anu micca a listessa struttura di u corpu, diverse coda è gruppi di testa diffirenti è poi rimpiazzatu u colesterolu è cuminciaru à fà LNP cù questi derivati. Ciò chì avemu trovu quì è chì hè ancu assai interessante hè chì u C24 alkyl derivativu di u colesterolu chì hè beta cytosterol è i gruppi formanu particeddi chì eranu assai simili à u LNP tipicu; anu avutu l'efficienza è a dimensione di l'encapsulazione simili. Ma, s'è guardate à l'efficienza di trasfezzione, era circa 204 megliu in e cellule di riscaldamentu è, sicondu i tipi di cellule, puderia esse 222 o 200 volte di differenza, chì era assai interessante per noi perchè, sapete, u campu s'hè focu annantu à i lipidi ionizabili cum'è i cumpunenti chjave è era interessante di truvà chì u colesterolu hà ancu una risposta chjave in quantu aumenta a consegna in e cellule. Allora, avemu pruvatu dui lipidi, unu hè u DLN-MC3-DMA è dopu lipid-9 era u rigalu di Moderna per noi, è avemu vistu l'efficienza di l'encapsulazione, eranu assai simili, a dimensione era un pocu più altu è ciò chì truvamu hè chì in citosteroli chì cuntenenu LNPs è ciò ch'e aghju chjamatu cum'è ELNPs o rinfurzà i LNPs, vede queste forme poliedriche, cusì hè u LNP tipicu, i sfarenti lipidi ionizable in questu, è tutti l'altri cumpunenti. L'unica diferenza hè chì u colesterolu hè statu rimpiazzatu cù cytosterol è ciò chì vede quì hè queste strutture di forma poliedrica. Se fighjate à a struttura interna di u colesterolu, hè più o meno uguale, ma hè solu a struttura esterna chì era diversa è ciò chì avemu ancu truvatu hè chì, se utilizate questi analoghi di derivati ​​alchilici C24, vi vede di novu differenze è cumu. a forma di sti strutturi era ma più cumunimenti chì questi eranu in forma poliedrica.

Allora, pudete dinò vede u listessu tipu di, sapete, i cambiamenti di morfologia chì sò accaduti è pensemu chì per via di queste variazioni strutturali, questu porta à diffirenzii in u trafficu di sti particelle. Allora, questu hè un altru video chì mostra l'imaghjini 3D multi-risoluzione, avemu pigliatu cun un cullaburatore, avemu fattu stu tipu di imaghjini d'alta risoluzione induve pudete visualizà sti nanoparticule di lipidi mentre entranu in cellule in 3D è cù LNP, vede chì sò basicamente bumping through the endosomal membrane and sketch it è mancanu quellu fattore di scappu, ma cù questi ELNPs o LNPs rinfurzati, vede stu muvimentu assai lineare in a cellula chì pensemu hè possibbilmente per via di una migliore scappata o ancu per una megliu diffusività. à l'internu di e cellule. Inoltre, ciò chì avemu fattu dopu era vulemu sapè s'ellu era veramente un paràmetru di fuga. Allora, avemu fattu una linea cellulare chì era basata in galectin-8, cusì per a fuga endosomale ci sò certe proteine ​​​​citosoliche, se una sorta di endosoma si danna, a galactin8 si lega à a so superficia è ciò chì truverete sò queste strutture puntuate chì formanu chì sò indicativu di a scappata chì succede. Allora ciò chì vede quì hè, in cellule verdi chì sò stati trasfettati in modu stabile cù galectin8GFP. Tuttu ciò chì vede quì hè u nucleu è a natura citosolica di sta proteina. Una volta aghjunghje u colesterolu, LNP, chì hè novu senza etichetta. Accuminciate à vede sti picculi strutture punctate o punti.

Tutti quelli avvenimenti sò avvenimenti rari chì mostranu a fuga di queste particelle. Comu dissi prima, a scappata hè relativamente bassu è noi, sapete, vulemu sempre capisce u metudu chì pò pruvà. Ma, una volta aghjunghje l'ELNP chì hè cuntenutu in cytosterol, vede stu apparenza massiva di galectinate chì era citosolicu quì. Avà, cuminciate à vede assai vesiculi endosomi chì sò stati formati, chì indicanu chì vi vede una fuga assai alta chì succede in a cellula. Allora, se poi quantificate, questu hè in fondu a fuga di colesterolu, è cù cytosterol cuminciate à vede sta fuga assai alta chì succede cum'è indicata da questa prova di reclutamentu di l'aiutu di cunnessione. Dunque, formemu nanoparticuli lipidichi cù u beta citosterol derivatu di u colesterolu o i so analoghi chì portanu à una diffusione megliu in a cellula. In una certa manera, ci hè una disintegrazione di e particelle è in un modu megliu cù u LNP cunvinziunali è u lipidu ionizable chì poi interagisce assai più efficacimente cù a membrana endosomale chì pruvucarà una migliore fuga è chì porta à una sorta di un endosoma dannatu induve u galactinatu si lega è pudete visualizà. lu. Dunque, questu ci hà datu un altru suggerimentu di cumu pudete migliurà a fuga endosomale. Allora, quandu a pandemia di COVID hà colpitu, avemu pensatu, sapete, cuntribuiscemu ancu in u nostru modu in u campu è, sapete, l'industria stava digià travagliatu nantu à u fronte di i vaccini. Allora, avemu pensatu perchè ùn avemu micca travagliatu nantu à a strategia per prevene o basicamente una strategia antivirus di una terapèutica è aduprendu a tecnulugia basata in mRNA. Allora, in questu casu, ciò chì avemu fattu era, cusì SARS-CoV-2 entra in i pulmoni utilizendu u receptore ACE2 chì hè ancu una enzima, ci hè ancu una forma soluble di ACE-2 chì hè assai pocu spressione in u corpu. Avemu pensatu chì se ingegneriamu a forma solubile di ACE2 cum'è un mRNA, u trasmettenu à l'internu dopu una iniezione IV o inalazione, questu portarà à a secrezione di a forma solubile di ACE2 chì agirà cum'è un decoy è impedisce l'infezzione.

Allora, avemu ingegneriatu a forma soluble di ACE2 induve avemu fattu una variante chì ùn hà micca u duminiu di a membrana Trans di ACE2 è avemu avutu un tag V5 solu per quantificà una volta trasfettate e cellule. Allora, in e cellule di pulmone Calu-3 cù a nostra formulazione ELNP ciò chì truvamu hè in i medii di cultura chì vede una quantità enormosa di solver menu troppu. Se trasfettate e cellule è fate un analisi di western blot, di novu vi vede assai pruduzzione di prutezione. Allora, a proteina soluble ACE2 hè furmata da a cellula è poi hè secreta in i media. Una volta instillate queste particelle in u pulmone, perchè u pulmone hè u situ primariu induve u virus funziunamente agisce cù l'assay di u reporter, pudete vede chì l'espressione dopu a stallazione nasale hè principalmente in u pulmone, è in u fluidu di lavaggio alveolare bronchiale di u pulmone, cumencia à vede a secrezione di ACE2, in 24 à 48 ore è avemu ancu fattu una iniezione IV è pudete vede cum'è duie ore, cuminciate à vede a secrezione di ACE2 in u serum. Allora, ciò chì avemu fattu dopu hè fattu un pseudovirus SARS-CoV-2, chì avia a proteina spike nantu à questu è u genu di luciferase, questu interagisce cù u receptore ACE2 è poi vede l'attività di luciferase.

Allora, ciò chì pudete vede quì hè chì quandu sopra esprime ACE2, cuminciate à vede chì a proteina spike cumencia veramente à ligà è trasduce e cellule. Se ùn ci hè micca ACE2, ùn hè micca travagliatu. VSV, chì hè una glicoproteina chì hè indipendente da ACE2, pò infettà e cellule, indipendentemente da a so dispunibilità di ACE2 in elli. Allora, una volta chì avete stu ACE chì travaglia à quellu tempu, perchè avemu publicatu questu in lugliu di l'annu passatu, sapete, ci hà pigliatu un pocu di tempu per capisce cumu fà stu travagliu, ma una volta chì poi trattate i nanoparticuli di lipidi chì avianu u soluble. forma di ACE2, questa hè l'infezione di pseudovirus spike in ACE2 sopra cellule espressive. Una volta aghjunghje l'ACE2 soluble, vede u 90 per centu inibizione di trasduzzione cù stu pseudovirus. VSV hà un cuntrollu indipendente di s'ellu ci era o micca solubile ACE2 pò ancu trasduce a cellula. Allora, attualmente avemu travagliatu cù alcuni di i nostri cullaburatori per fà questi studii in mudelli animali vivi è sperendu, sapete, a prossima volta aghju avutu ancu qualchi dati nantu à questu fini. L'altra cosa, pre-COVID chì avemu travagliatu è chì basicamente ci hà aiutatu à passà in u campu di a consegna di i pulmoni abbastanza veloce era a fibrosi cistica. CF hè un disordine pulmonar; ci hè una assenza di CFTR chì hè un canale ionicu chì secrete clorur. Dunque, s'ellu ci hè una assenza di cloruru, u mucus s'ingrossa è dopu ci sò infizzioni secundarii chì causanu a fatalità. Vertex hà ghjuntu cù qualchi molécule chjuche chì sò state veramente trasformative per i malati cù CF, ma ci sò assai mutazioni trà CFTR è cusì, se pudemu avè una strategia chì pò rinvià u genu CFTR, hè pussibule chì indipindenti. di u genotipu di u paci, puderà risolve stu prublema. Allora, in questu sensu, avemu di novu ingegneria un CFTR-mRNA, avemu fattu i nanoparticuli di lipidi, è poi transfected i celluli è cumu si teste i pazienti CF ancu in a clinica face una differenza di potenziale nasale perchè l'epiteliu di a via aerea hè assai simili à l'. epiteliu pulmonale. Vi vede chì u canali di cloruri ùn hè micca travagliatu. Allora, utilizendu a differenza di potenziale nasale, avemu quantificatu di novu a nostra capacità di furnisce i LNP cù CFDR-mRNA è ciò chì avemu trovu hè chì una volta chì dà u CFTR-mRNA, a secrezione di cloruri torna è, sapete, stà quì per circa 14. ghjorni.

Dunque, attualmente ciò chì facemu hè di fà particelle nebulizzate, in modu chì pudemu fà una amministrazione ripetuta à u pulmone cù CFTR-mRNA. L'altra cosa chì avemu ancu fattu hè chì avemu dettu chì pudemu usà un altru mira in u CF. Dunque, un altru mira in u CF hè un canali di sodiu, l'espressione eccessiva di stu canali di sodiu provoca sodiu à afflussu in più, è ci sò studii chì suggerenu chì s'ellu ùn ci hè micca CFTR, u canali di sodium enact hè iperattivu. Induve u sodiu va l'acqua va è dunque u mucus diventa assai grossu. Allora, l'imprese anu pruvatu à fà un siRNA contr'à u canali di sodiu è cusì avemu pensatu piuttostu cà a strategia siRNA perchè ùn facemu micca una strategia basata in mRNA induve puderebbe fà un mutante di una di e subunità di ENaC chjamata alpha ENaC è questu. a subunità hè l'elementu chjave, cusì in u timer di alfa, beta, gamma, alfa hè sempre necessariu, alfa è beta ponu travaglià, è alfa è gamma ponu travaglià è l'altra grande cosa cù sta tecnulugia hè chì, questu hè una sorta di cellula. selettivu perchè u canali funziunà solu induve l'altri subunità sò ancu espressi.

Se dà i tipi di cellula di tonu di subunità alfa chì ùn anu micca l'altri subunità, ùn funziona micca. Allora, una volta chì avemu fattu questi mutanti, avemu trasfettatu e cellule è ciò chì truvemu hè chì u currente di sodiu basicamente diminuisce dopu à a trasfezzione in paragunà à a versione micca trattata. Dunque, questa hè a versione micca trattata, una volta chì avete principiatu à trattà cù u mutante alfa, u canali di sodiu diventa una sorta di menu ... hà un afflussu menu di sodiu in e cellule. Allora, a nostra strategia attuale hè chì se pudemu dà u CFTR-mRNA cù u mutante ENaC, pigliate cumminatu chì puderia esse una strategia megliu contru i pulmoni CF. Dunque, attualmente l'idea hè di nebulizà e particelle è fà una sorta di titrazione di dosi induve facemu diverse dosi, ma ancu dosi per tempi diversi è mantene a funzione di sti proteini di destinazione. Cumu l'aghju dettu per a terapèutica hè assai più difficiuli, perchè avete da redosà l'animali parechje volte è u prublema cù a nebulizazione hè chì e particelle, in fondu sò materiale assai morbidu, perchè ponu sparghje. In questu casu avete bisognu di una particella stabile chì pò disintegrate in i celluli è assai pocu tempu un studiente graduatu di u mio hà fattu una certa formulazione chì pò piglià u nostru LNP tipicu. E, sapete, cù qualchi cambiamenti di formulazione in questu, pudemu nebulizà queste particelle, è trasfettanu u mouse longu abbastanza bè. Dunque, attualmente avemu travagliatu cù l'usu di l'ARNm CFTR o ancu a strategia ACE2 è furnisce una particella nebulizzata cù a cumpusizioni simili di un LNP è cum'è aghju dettu prima, se cumminciamu à purtà e cose à u pulmone, à u core, à l'altru. organi, hè trasfurmativu perchè ci sò tanti altri miri di geni chì pudete andà dopu, pudete andà cun l'edituri di geni di alcuni di questi.

Per esempiu per CFTR, perchè sò modulari in natura, cusì una volta chì avete successu quì, apre e vostre porte à parechje altre malatie, è ancu altri tipi di carichi. Infine, l'ultimu locu induve pensu chì ci muviamu, è pensu chì per u trasportu hepatic extra hè a consegna localizzata à l'ochju. L'ochju hè, sapete, l'acuità visuale in l'ochju hè duvuta à a retina chì ùn hè micca prisente in u spinu di l'ochju, cusì a luce entra in fondu è và à a retina, è cusì s'è guardate quì hè in fondu. da questu latu quì da a capa di cellula ganglionica versu i photoreceptors è i photoreceptors sò induve a luce hè poi cunvertita in un signalu elettricu chì poi torna è hè trasmessu à u cervu. Se ci hè una degenerazione di i fotoreceptori, provoca cecità. Allora, assai degenerazioni di a retina ereditati sò causati perchè i fotoreceptori degeneranu è lentamente, sapete, pudete vede un zitellu cum'è crescenu in un adultu, ponu turnà cecu. L'altru tipu di cellula chì hè criticu in a degenerazione di a retina ereditata hè a RPE; RPE hè una cellula epiteliale pigmentata, cusì sò tutte e cellule neuronali quì. RPE hè a cellula epiteliale, chì aiuta à pulizziari u segmentu esternu di i fotoreceptori, cusì ogni matina quandu si svegliamu sti segmenti esterni sò basicamente tagliati, sò rigenerati in daretu è i tagliati fora di i segmenti esterni di questi fotoreceptori sò inghiottiti è degradati. Dunque, se l'RPE va male, i segmenti esterni cumincianu à dipositu nantu à l'RPE è chì provoca ancu a degenerazione.

Allora, mutazioni in RPE è i fotoreceptors causanu, sapete, questi generalmente portanu à una degenerazione retinale ereditata è a retinitis pigmentosa. Una terapia chì hè stata appruvata hè una terapia AAV chì rinvia un genu chjamatu RPE-65 è questu hè un tipu di trattamentu unicu, ma ci sò assai geni chì sò più grande in grandezza è se vulete fà qualcosa hè. Hè megliu furnisce alcuni di questi cumpunenti genomici cum'è u cas9 cum'è nucleasi piuttostu chè avè trasfettatu stabilmente a cellula. Dunque, avemu pensatu chì pudemu sviluppà LNPs chì ponu purtà à u spinu di l'ochju, in particulare i fotoreceptori è l'RPE. A sfida hè a consegna. Allora, a strada per quale pudete veramente trasfettà u spinu di l'ochju hè una bleb subretinale. Allora ciò chì fate hè di piglià una agulla è andate in u spinu di a retina daretu à u sub RPE è daretu à sta regione quì è injecte e vostre particelle quì. Allora, a bona nova quì hè chì hè assai più vicinu à a vicinanza di u tipu di cellula. A sfida hè chì duvete andà in tuttu u ritornu, avete bisognu di clinichi qualificati assai altamente schermati per fà questu, è hè un colpu unicu, ùn pudete micca fà una re-iniezione. In ogni casu, l'altru modu chì pudete furnisce à u spinu di l'ochju pò esse iniezione intravitreale cose cum'è VEGF sò datu mensili cum'è una iniezione intravitreale, ci hè un cumplimentu più altu di u paziente, ùn ci hè dannu à a retina, ma vitreous hè assai viscosu è ci hè un tissutu bassu. a penetrazione per quessa. Dunque, per i vettori non virali è virali, a consegna dopu una eiezione intravetriale hè un prublema enormu è cusì, facemu una nanoparticella lipidica è questu basamente mostra u prublema. Allora, pudete fà una iniezione in daretu, aduprate un LNP, vi vede a trasfezzione di l'RPE, cusì micca i fotoreceptors l'LNPs sò LNPs tipichi, solu injecta in u spinu di l'ochju quelli cellule epiteliali, chì di novu si pò trattà alcuni. di e malatie di ... chì sò dovute à e mutazioni di RPE, puderia ancu esse trasformative.

Comu avemu vistu cù luxtarna chì hè un mètudu basatu AAV. Ma, se dà una iniezione intravitreale allora ciò chì truverete hè chì dopu una iniezione intravetrial avete a trasfezzione solu à a periferia. Dunque, ci hè una piccula membrana chjamata a membrana limitante interna chì impedisce tuttu ciò chì pò passà è ghjunghje à u spinu di l'ochju. Allora, i tipi di cellula di u nostru interessu sò quì, questu hè a camera vitreous induve site injecting è e cose, i nanoparticuli sò basamenti chjappi in questa regione. Allora ciò chì vulemu sviluppà sò metudi chì ponu guidà i LNP à attraversà queste barriere, ghjunghje à u spinu di l'ochju, è furnisce droghe. Allora ciò chì avemu fattu prima era chì avemu fattu, avemu screened differente lipidi cationici, è avemu trovu chì trà elli MC3 era u megliu unu per chjappà u RPE, assai pocu à nunda in i photoreceptors, allora avemu ancu screened altri cumpunenti. Allora, avemu mudificatu u colesterolu, peg hè, sapete, pruvucarà stabilità è cum'è a regulazione di l'hype pò purtà à una penetrazione megliu in u vitreous. Dunque, avemu vulutu pruvà ancu questu. Ciò chì avemu usatu sò i topi Ai9, chì anu un situ di stop di velocità di log cù u pumadoru 3D. Allora, se dà un trè mRNA, ùn causa l'edituri è per quessa tuttu ciò chì pudete visualizà i pumati 3D.

Allora, una volta chì l'avete injectatu in l'ochju, dopu una iniezione subretinale, avemu cuminciatu à vede cù l'imaghjini di fundus, cusì hè in un animale vivu, pudete solu piglià un strumentu è fighjà in u spinu di l'ochju è u signale rossu hè suggerenu chì ci hè statu editatu chì hè accadutu perchè avete datu nanoparticuli di lipidi cù trè mRNA. Dopu una iniezione intravitreale, cum'è pudete vede quì, a trasfezzione hè relativamente bassu è una volta chì tagliate e rùbbriche, capite chì a maiò parte di a trasfezzione hè in l'RPE è questu hè basicamente quì hè in a membrana limitante interna è nunda ùn ghjunghje veramente à u spinu. di l'ochju. Dunque, avemu ancu guardatu à quali sò i miccanismi da quale a consegna hè accaduta. In questu casu, damu un LNP cun mCherry. Vi vede dinò un RPE chì hè trasduciutu o trasfettatu. In i topi knockout ApoE, se pigliate topi knockout ApoE, consegnate l'IV di LNP, ùn vedete micca alcuna consegna di fegato, ma in casu di l'ochju, vedete una consegna assai bona in u spinu. Dunque significa chì ApoE ùn hè micca u tipu primariu di ligand endogenu chì aiuta à e particelle à andà in l'RPE. Avemu avutu un altru receptore fagociticu chjamatu MertK è dinò vede sempre una trasduzione assai bona per quessa. Allora ciò chì avemu fattu avà hè chì in realtà usemu diverse tecnulugia per chjappà questi LNP à i fotoreceptori, è avemu fattu qualchì successu quì. Ma anu avutu ancu successu à fà e particelle è ingegneria chì ponu attraversà è ghjunghje sin'à u fondu di l'ochju è spergu chì puderaghju discutiri quelli mentre li publicemu in un paru di mesi.

Allora, a prossima volta chì sò quì possu parlà di cumu queste avemu ingegneriatu sti tecnulugii chì ponu veramente attraversà è chjappà diversi tipi di cellule, in particulare i fotoreceptori è l'RPE, è pensu chì apre parechje porte micca solu per u genu. consegna, ma pensu chì sò entusiasmu di a genetica, sapete, l'edizione genetica di parechje mutazioni diverse in l'RPE o i fotoreceptori perchè seria cum'è un trattamentu unicu. Dunque, questu hè un pocu di l'imaghjini di u nostru tipu di dati inediti induve avemu scupertu i metudi di ingegneria di sti nanoparticuli di lipidi chì pudete injectà per via intravenosa è cumincianu à trasduce una pupulazione cellulare diversa, in particulare i fotoreceptori in l'ochju è pensu chì hè assai eccitante per noi. Allora, infine, pensu chì induve u campu si move hè una consegna extra epatica, ci era evidenza è quandu era un, sapete, un post doc in u laboratoriu Langer Anderson, avemu in realtà iniettatu alcune particelle à u cervellu è avete cuminciatu à fà. vede l'espressione in quattru ore.

In novu, a cosa quì hè chì saria limitata per qualchì tempu solu; A consegna intramusculare hè avà pussibule, a consegna di u fegatu hè pussibule. Ma, pensu chì andemu lentamente in a fase di consegna localizzata. Vi aghju dimustratu alcuni esempi di consegna basata nantu à l'ochju, spedizione di pulmone basatu in nebulizazione, ma ci sò ancu approcci intravenosi chì aiutanu a consegna epatica extra. Per esempiu, Dan Siegert hà publicatu u so travagliu utilizendu una tecnulugia chjamata sorta chì pò chjappà u pulmone è pudete aduprà per l'editazione di geni o a consegna di geni. Ci hè evidenza di l'usu di polimeri per l'iniezione intraperitoneale chì ponu colpisce i macrophages. Pensu chì u campu si moverà ancu in l'area di u tipu di cellula specificu è questu ùn hè micca qualcosa chì hè scupertu pocu tempu, qualchì volta parlu cù a ghjente è ùn hè micca chì u campu ùn era micca travagliatu in questa zona. Ma pensu chì avà cù questi avventi di e novi tecnulugii è cumu a pandemia hà ghjucatu, ci hè tantu interessu chì pudemu esse capace di risolve queste sfide à longu andà chì avemu avutu in u campu.

A tecnulugia di codice à barre di l'ADN, pensu chì hè un altru modu fantasticu di screening assai di sti nanoparticelle lipidiche è chì ponu ancu aiutà à attivà a consegna, cum'è truvà se una nanoparticella di lipidi colpisce diversi tipi di cellule in l'organi, altre strategie d'alta produzzione di fà queste. i materiali seranu sempre in u modu, i novi materiali è a chimica sò impurtanti. Ma, pensu chì questu seria cum'è una cosa cíclica induve facemu alcune cose chì sò basate nantu à fà particeddi, è dopu à pruvà solu, ma dopu pruvate à capisce fundamentalmente. Cum'è in u casu di ApoE, basatu cum'è a consegna di LNP chì ci pò aiutà à ingegneri materiali megliu è megliu è poi vultà à u ciculu è in una sorta di evoluzione questi materiali à a so prossima generazione è pensu chì hè quì induve simu induve hè prubabile. chì, sapete, in cinque o deci anni, avariamu o ancu più veloce datu l'interessu nantu à u campu chì seremu capaci di cuncepisce materiali più novi chì sò i materiali di a prossima generazione chì ponu chjappà diversi miri è una volta chì succede, pudete furnisce. diversi carichi per via di a modularità di questi materiali è una volta chì pudete furnisce diverse carichi, sapete, pò silenziu un genu, pò dà imballaggio, pò edità un gene è pensu chì saria trasformativu per u campu, è questu hè perchè questu hè una rivoluzione industriale. Infine, vogliu ringrazià i mo membri attuali in u laboratoriu è i membri passati, i cullaburatori è ancu a fundazione CF è u NIH per u finanziamentu è cun questu possu piglià qualsiasi di e vostre dumande è torna ringraziu assai per questu invitu assai gentile, hè statu un piacè. 

[00:45:53]

Nima Tamaddoni, PhD

Benintesa! Grazie mille, Dr Sahay. Era assai informativu, di sicuru è grazie per tutte l'infurmazioni assai di punta chì avete furnitu à l'audienza, avemu parechje dumande avà. Graham hà da leghje à voi è pudete risponde à l'audienza. Allora, Graham pudete dumandà certamente.

[00:46:22]

Graham Taylor, PhD

Di sicuru! Allora, sì, duttore Sahay, grazie assai. Avemu avutu uni pochi di dumande, per esempiu da Stephanie Khan, ella dumandava circa alcune di e dati di sax chì sò stati spartuti in quantu à e strutture interne di u LP è cumu pudemu rivisione, cumu pudemu identificà diversi cumpunenti di u LNP usendu sax. analisi?

[00:46:44]

Dr Gaurav Sahay

Iè, cusì pensu, sapete, hè una bella quistione è dinò questu hè statu fattu cù a cullaburazione cù Moderna in quellu tempu è pensu, sapete, avianu qualchi prufessiunali assai simili per fà. Ma da u mo puntu di vista ciò chì pudete fà hè fighjà solu a struttura interna è ci hè ancu un documentu extrazynic induve sò, sapete, fighjendu a struttura interna di sti particeddi è inizialmente avemu pensatu chì puderia esse un cambiamentu. in a struttura interna. Ciò chì avemu trovu era, sapete, nisuna differenza. In novu, ci sò metudi precedenti induve puderete aduprà, sapete, UHPLC è cose cusì, solu per vede i diversi cumpunenti di i lipidi. Allora, ci sò stati scritti publicati in 2013 chì cumu pudete fighjà, una volta chì avete fattu a particella cumu pudete caratterizà, sapete, quantu cuntenutu di lipidi ci hè. Ma vultendu à a quistione di SAKS, pensu chì palesa una struttura interna è pensu chì ci vole à fà più. Ciò chì avemu trovu ùn era micca differenze è ci hà pigliatu un pocu di tempu per fà quessa perchè ci era ancu, sapete, i prublemi di u rumore è cose cusì.

Allora, pensu chì cumminendu Saks cù cose cum'è, per noi pensu perchè avemu cum'è un centru di EM basatu in NIH, solu in u nostru sotano cù sei sette brame diverse, era assai più faciule per fighjà questu è induve una volta avemu cuminciatu à calculà. fora u, sapete, chì ci hè una struttura esterna chì hè cambiatu, avemu spustatu in quella direzzione. Ma, pensu chì cumminendu sti tecnulugii diffirenti puderia esse utile solu per revelà induve è cumu queste, Saks puderia dà, sapete, micca induve sò esattamente i lipidi, ma almenu ciò chì l'urganizazione di u lipidu hè internamente. Solu ùn sapemu chì, nò? Cum'è sapemu cù EMs, sapete, a morfologia hè diversa, ma cumu sò queste cose, sapete, hè in una sorta esagonale invertita di morfologia interna, chì forme piglianu in a cellula chì hè l'elementu criticu chì Saks pò dà. è chì puderia aiutà perchè, sapete, in quantu à a spedizione cumu queste cose sò liberate è in quale forma pò esse qualcosa impurtante per noi di nutà.

[00:49:05]

Nima Tamaddoni, PhD

Fantasticu!

[00:49:06]

Graham Taylor, PhD

Ebbè, grazie assai Dr Sahay, è ringraziu Stephanie per sta quistione. Iè, cusì un'altra quistione, questu serà forse più simplice da Muhammad Islam, dice un grande travagliu Dr Sahay. Se ùn furnisce micca LNP via IV o intravenosa, a proteina ApoE hè implicata in l'assunzione cellulare? 

[00:49:33]

Dr Gaurav Sahay

Questa hè una grande quistione. Allora, sapete, in l'ochju ùn truvamu micca chì, cusì quandu avemu usatu un knockout ApoE, sapete, mudellu in l'ochju, truvemu chì e particeddi sò solu esse furnite ancu in l'RPE. Allora, ùn sapemu micca ciò chì hè ubligatoriu à a superficia di un LNP, in l'ochju, u listessu LNP chì esige ApoE dopu una amministrazione IB. Ùn sò micca cunnoscu cù u musculu, nò? Dunque, ùn aghju micca vistu dati quì, ma per ciò chì cunnoscu per l'ochju in particulare, sapete, ApoE ùn era micca necessariu. Dunque, ci ponu esse altre proteine ​​​​chì aiutanu à ubligatoriu è trasduzzione o trasfezzione cù queste particelle.

[00:50:25]

Graham Taylor, PhD

Va bè. Videmu, una quistione, una quistione supplementu era di dumandà s'ellu puderia spiegà un pocu di più nantu à l'ACE di fuga endosomale chì avete spiegatu? Forse questu era cù u gasu, cù a proteina, l'endosomes danni.

[00:50:44]

Dr Gaurav Sahay

Iè, dunque, pensu, cusì a galactin8 hè una sorta di proteina citosolica, è hè stata scuperta quandu a ghjente stava veramente guardandu micobacteria. Allora, in 2012 o qualcosa, sapete, a ghjente hà guardatu, sapete, ciò chì succede quandu u mycobacterium infetta e cellule è sta proteina citosolica, basicamente hè stata identificata chì si lega à a vesicula dannata è porta à un autofagosoma per a distruzzione. In u 2013 allora Anders Vitro per a prima volta hà dimustratu chì, se utilizate un LNP cù un siRNA, sti galactin una sorta di ligami ancu à a superficia di l'endosome è dopu, sapete, in ora è cum'è, sapete, avemu dimustratu cù mRNA, ma ci sò carte cù altre galectine è certi persone anu dimustratu ancu cù polimeri. Dunque, a storia hè chì questa hè una proteina citosolica chì si lega à un endosoma dannatu chì hè poi inghiottitu da un autofagosoma per esse distruttu. Dunque, questu funziunamenti funziunamentu dunque cum'è un sensoru, cusì pigliate un LNP, avete cellule chì sò trasfettate stabilmente cù galectin, sò citosolichi in natura, aghjunghje solu quelli particelle è avete da cumincià à vede e strutture di funzioni chì succedenu. Cù l'ELNP ciò chì avemu trovu era chì era cum'è una migliione di decu volte in una sorta di compra di galactin8 à un endosoma chì mostra chì ci hè più tipu di danni ligeri chì succede, è chì aiuta più in a fuga chì porta à una trasfezzione megliu. chì vedemu cù l'ELNP.

[00:52:38]

Graham Taylor, PhD

Iè, fantasticu! ACE veramente innovatore, era video incredibili per vede chì succede in diretta in e cellule è poi veramente correlate à a trasfezzione, pare. Videmu. Allora, questu forse simplice, qualchissia avia dumandatu s'ellu ci hè una dimensione specifica, una dimensione di destinazione per e particelle, una dimensione di particella ideale di LNP per a vaccinazione o a consegna di geni.

[00:53:08]

Dr Gaurav Sahay

Dunque, questa hè una bella quistione è pensu chì ci hè un documentu recente da Moderna, pensu chì l'autore currispundenti induve per novu questu hè, sapete, duvete esse attentu à u cuntestu perchè a dimensione puderia impurtà per l'ochju induve a limitazione interna. A membrana hè assai chjuca, ma per a pupulazione immune dopu l'iniezione intramusculare, anu dati di primati non umani chì ùn importa micca veramente in quellu casu induve e particelle più grande anu pussutu dà una risposta immune assai simili in quantu à una particella più chjuca. . So, si veramenti dipende di induve vi sò injecting perchè pensu chì per e cose à attraversà dopu à dà una iniezione IV, i fenestrate sò attornu 200, nanometer in size, cusì avete bisognu di una particella megliu chì hè sottu à 200, nanometer à chjappà u fegatu. U musculu, pare chì ùn importa micca veramente. Ùn sò micca, sapete, se a carica importa o micca è in l'ochju di sicuru avete bisognu di particelle più chjuche si avete da attraversà certe barriere. Dunque, dipende da u tippu di cellula è, sapete, e cellule immunitarie ponu ingurgitate grandi cose è l'urganu è e barriere chì deve attraversà prima di cumincià à cuncepisce ancu queste particelle.

[00:54:30]

Graham Taylor, PhD

Allora, sì, in un certu modu dipende.

[00:54:34]

Dr Gaurav Sahay

Iè, dipende. Vogliu dì chì ùn pò micca impurtante per certu, sapete, dunque si travaglia nantu à a cosa immune, ùn pò micca, ma puderia impurtà s'ellu si dà à altri organi.

[00:54:49]

Graham Taylor, PhD

Di sicuru! Videmu chì avemu un saccu di dumande veramente boni chì venenu. Qualchissia avia dumandatu ciò chì determina a specificità di tissutu di una particella interna o pò esse ingegneria per esse specificamente per u cervellu? Allora, sì, forse qualsiasi cumenti nantu à ciò chì determinà a specificità o ciò chì sapemu quì 

[00:55:09]

Dr Gaurav Sahay

Prima di tuttu, pensu chì i LNP anu successu à chjappà in i lati di battaglia perchè anu finitu prima, pensu chì stanu à sente un pocu ... cusì, sapete, basamente piglianu ApoE in u serum è questu hè ancu pigliatu tempu, cusì a ghjente pensa oh vi consegnate nanoparticelle, andanu à u fegato, sì, ma i cuffer cells, ci hà pigliatu al-ilam è MIT è UBC cum'è 10 anni di, sapete, travagliendu inseme una sorta di calculà lipidi ionizable chì eranu abbastanza potenti chì ponu chjappà. l'hepatocytes di u fegatu è chì era perchè avianu a capacità di ligà à ApoE. Allora ci sò altre particeddi chì sò scuperte cum'è a spada è altri chì, sapete, puderanu dumandà altre proteine ​​​​serum chì ponu purtà à un certu organu specificu. Ma, sapete, e proteine ​​​​serum ponu ancu esse più bassu in cuncentrazione. Allora a quistione di pudete targeted them is also interesting, if you look at, you know, the body of thinking, like we have made this before where we have made targeting ligands on.

Una volta chì mette un ligandu di targeting nantu à una particella, u prublema hè chì ci hè ancu assai optionalization, cusì i proteini di u serum sò ancu ligami è ci hè statu difficultà in a consegna, sapete, dopu à targeting, avè dettu chì questu ùn significa micca chì questu ùn succede micca. Pensu chì hè sempre una idea preziosa è cum'è persone cum'è Dan Pierre travaglianu nantu à mette ligandi di targeting nantu à questu è cù l'avventu di tecnulugii più recenti è modi più rapidi per evoluzione sti particelle, pudemu esse ancu capaci di destinà elli, hà hè statu sfida micca faciule. U megliu hè stata una particella chì hà appena pigliatu una proteina di serum è hè stata liberata per via di a natura di a particella, ma pensu chì a capacità di mira, ùn pudemu micca sottovalutà è dinò, u campu hà travagliatu, dunque si parlate cù e persone in u campu, seranu cum'è, sapete, avemu fattu questu prima, hà avutu sfide incredibili. Ma, pensu, cum'è l'aghju dettu prima, cù e tecnulugia novi chì venenu per screening è cose cusì, hè pussibule chì, sapete, puderemu ancu di mira. Allora, hè pussibule di fà tramindui, hè cum'è, pensu chì ci vole à piace à fà una bona scienza per risolve alcune di queste sfide. Allora, puderia esse, torna torna à a vostra dumanda di destinazione, puderia esse qualcosa chì a particella piglia in u serum è chì hè stata assai successu finu à avà. O pensu chì puderia ancu esse di mira avvicinamenti, anu avutu menu successu, ma ci hè a pussibilità chì si cumincianu à travaglià ancu dopu qualchì tempu, se questu risponde ...

[00:58:15]

Nima Tamaddoni, PhD

Va bè, assai bè, assai bè. Va bè, vai avanti. 

[00:58:24]

Graham Taylor, PhD

Va bè. Fantasticu! Scusate per l'eco quì. Dunque, vedemu, questu hè una quistione di Yamin Zhao, cunziddi u scambiu di lipidi è l'interazzione cù lipoproteini è plasma, a formulazione LNP originale prima di l'iniezione pò esse micca a stessa formulazione chì hè internalizzata da e cellule. Ci hè una manera di misurà o cuntrullà a struttura di LNP chì infine culpisce a cellula?

[00:58:51]

Dr Gaurav Sahay

Pensu chì hè una grande quistione. Pensu chì hè qualcosa chì noi, sapete, cum'è un scopu longu di u mo laboratoriu hè di capisce u trafficu in vivo, nò? Cum'è i passi chì vi aghju dimustratu, di novu questu hè statu più duru perchè a fuga hè cusì bassa, chì ùn pudete micca veramente visualizà nunda, cù questi ACE più novi cum'è galactin è pudete fà. Ma a sfida hè cumu fate questu in vivo è una volta chì avete cuminciatu à fà questu in una manera più veloce in Vivo, pudete allora cumincià à circà in a struttura ancu in vivo. Dunque, sò d'accordu cù u Yemen chì ci hè un scambiu chì succede è dopu una volta chì e cose sò interiorizate, à l'internu puderanu esse in una manera completamente diversa. Allora, per esempiu, particelle basate in MC3, in vitro sò bè, nò? È ci hè di novu a quistione di a correlazione in vitro à in vivo chì hè assai limitata in u nostru campu, ma avè dettu chì si fighjate à MC3 in vitro, funziona bè, ma in vivo hè ghjustu fantasticu, nò? Allora, ci hè qualcosa chì succede quì induve a particella diventa ancu più potente perchè a so struttura hè tale chì pò interagisce cù vesiculi endosomali, cusì hè una quistione più fundamentale. Pensu di sicuru chì ci vole à capisce modi per risponde à questu. Ùn simu ancu quì in quella zona è chì deve esse attivamente investigatu. 

[01:00:26]

Nima Tamaddoni, PhD

Avanti.

[01:00:27]

Graham Taylor, PhD

Allora, iè, pensu chì u tipu va à una quistione di, sapete, quandu in u sviluppu di a formulazione è a prova, hè megliu andà direttamente à teste individuali è principià quì per andà in teste in vivo è passà, sapete, qualsiasi travagliu in vitro o tramindui è forse cambia in basa di l'applicazione? Allora, forsi pudete parlà un pocu di cumu si avvicinassi à questu, se avete una preferenza per andà direttamente à mudelli animali o forse cambia.

[01:00:57]

Dr Gaurav Sahay

Allora, pensu, sapete, ci hè a ... correlazione in vitro à in vivo in u campu hè abbastanza male è cusì se avete a capacità di andà direttamente in vivo, pensu chì hè a megliu strategia, avè dettu chì pensu. assai studii fundamentali sò limitati chì ùn pudete micca esse realizatu à questu puntu. Avemu da sviluppà manere di fà in vivo, dopu avè dettu chì alcune di e particelle chì, sapete, ùn anu micca travagliatu in tuttu, quandu avemu principiatu fundamentalmente à capiscenu. Per esempiu, s'ellu aghjunghje una particella chì hè dipendente da ApoE, ùn trasfetterà micca e cellule è appena cuminciate à aghjunghje ApoE, l'in vitro per migliurà a vostra correlazione cù quelli particeddi cuminciaru à aumentà. Allora, pensu chì una volta avete una capiscitura fundamentale, allora quella correlazione diventa megliu. Ma, quandu hè un campu più novu, in fondu allora andendu direttamente in vivo hà sensu. A volte ùn hè micca pussibule solu per via di risorse o hè ancu s'ellu avete tippi di cellule primarie, puderanu esse assai più rapprisentanti di l'ambienti in vivo. Ma, sapete, pensu chì s'ellu ci hè una manera di pruvà cum'è per voi chì hè più faciule è cum'è chì ti fa alluntanassi da in vitro, andaraghju ancu direttamente in vivo. Ma ci sò certe cunsiderazioni, soprattuttu s'ellu ci sò cellule primarie, cellule umane primarie chì pudete aduprà allora chì face una sorta di sensu. À a fine di u ghjornu, avete da pruvà questu in vivo è, sfurtunatamenti, a correlazione hè abbastanza male. Allora, se pudete saltà certi passi per ghjunghje direttamente in vivo, pensu chì hè abbastanza bè, ma dinò dipende ancu da u tipu di studii chì pruvate di fà. Chì puderia esse una risorsa limitata per andà dopu.

[01:02:54]

Graham Taylor, PhD

Di sicuru! Va bè, vedemu, pensu chì avemu tempu per uni pochi di dumande. Susan Kiati hà dumandatu à vede, vedemu s'ellu sona una campana. Pudete cummentà nantu à u prugettu di guida FDA da dicembre 2017 nantu à i nanomateriali? Ci sò sfide specifiche chì venenu da sta guida?

[01:03:18]

Dr Gaurav Sahay

Aghju da dì chì ùn aghju micca idea quì. Ùn aghju micca guardatu à a guida, sapete, micca, sapete, duverebbe, in fondu, pensu chì una bona idea, soprattuttu pensu chì avà cù a vacuna, pensu chì una di e cose seria cruciale hè cum'è quantu veloce pò appruvà a FDA, s'ellu hè u stessu LNP, è cum'è RNA simili. Allora, tutte queste cose sò assai, sapete, interessanti per sapè è aghju aspittatu per quessa, ma sfurtunatamenti ùn sò micca sapè di a guida di u 2017.

[01:03:54]

Graham Taylor, PhD

Iè, pensu chì hè una bona guida da u 2017, dunque, avaria ghjunta tecnicamente pre-COVID, ma hè stata certamente redatta cun questi tipi di terapie è vaccini in mente, sapete, prudutti biologichi chì cuntenenu nanomateriali chì sò in sè stessu. largu ma pò esse applicatu cusì.

[01:04:14]

Nima Tamaddoni, PhD

È sta quistione pò esse dumandata à parechji di i nostri parlanti u venneri.

[01:04:20]

Graham Taylor, PhD

Questu hè veru. Allora, sì, averemu a pussibilità di parlà un pocu più di altre sessioni di Q / A, è altri pannelli nantu à qualchi più tipu di temi destinati à l'industria. Allora, cuminciamu, cuminciamu. Allora, questu hè qualcosa chì pudete esse capace di parlà, un'altra quistione di Susan in quantu à a consegna di a pelle, nanoparticula solida versus nanoparticella molle chì hè megliu consegna? Allora, fighjate forse chì sapemu quì ?

[01:04:50]

Dr Gaurav Sahay

Iè, pensu, sapete, a pelle di novu hè una di un'altra barriera è pensu chì a ghjente, sapete, puderia pruvà à aduprà cum'è alcune micro agulle per studià. Allora, sapete, avemu fattu un travagliu cum'è induve stavamu mettendu cum'è, sapete, particelle in un idrogelu, solu ùn hà micca fattu cusì bè. Allora, pensu chì hè, sapete, qualcosa induve a particella solida puderia esse assai megliu. Dipende da u tipu di formulazione chì fate hè in un hydrogel o hè in un specchiu o un patch. Dunque, sò basamente considerazioni di formulazione chì ponu esse verificate iterativamente. Stava à sente à qualchissia chì parlava di particelle solide per a consegna di a pelle ieri. Allora, pensu, di novu ùn aghju micca una sperienza persunale cun questu, ma hè più una formulazione iterativa cose chì si pò guardà è u disignu di a forma di dosa si pò guardà per capisce veramente se una cosa funziona o l'altra, sapete. , s'ellu hè un lipidu cum'è noi qualchì volta, sapete, sò sottovalutendu u putere di i polimeri perchè, sapete, sicuru, u travagliu nantu à i lipidi, ma prima cum'è aghju fattu u mo PhD, sapete, era nantu à un sistema basatu di polimeru, per quessa, pensu chì quelli anu ancu un meritu enormu, dunque, se andate dopu à quelli per a spedizione locale, puderia esse un modu per perseguite ancu. Dunque, hè materiali più novi, ma ancu forma di dosa è hè un prucessu iterativu chì pensu, sapete, a ghjente travaglia, è spergu chì sapemu più in u futuru.

[01:06:37]

Graham Taylor, PhD

Fantasticu! Videmu, avemu da dumandà una altra dumanda è dopu un altru panelista Hardik, pensu chì hà una quistione per sparte. Una quistione ci hè un cummentariu nantu à a differenza di relazione strutturale trà LNP cù mRNA mudificatu o micca mudificatu?

[01:06:57]

Dr Gaurav Sahay

Iè, va bè. Dunque, di novu, questu hè basatu annantu à i documenti chì sò ghjunti è micca, sapete l'esperienza persunale, ma in fondu pensu, sapete, e mudificazioni sò esse essenziali se ne suscitanu alcune, cunnosci diverse risposte. Ma, pensu chì e persone sò sempre travagliendu per fà una formulazione formale assai pura, sapete, ancu e formulazioni di RNA è chì pò esse veramente bè chì ci sò stati documenti sò stati mudificati è micca mudificati dopu avè datu IV ùn anu micca mostratu assai di differenza, ma per forse. cum'è ciò chì mostra cù i vaccini. E, sapete, sti prucessi clinichi chì e mudificazioni anu veramente aiutatu à dà una sorta di una bona risposta immune dopu. Dunque, pensu chì hè sempre un travagliu in prugressu ancu s'è i prucessi clinichi anu dimustratu chì e versioni mudificate sò megliu, ma per altre consegna o altre spedizione di destinazione è a purità di questi mRNA. Più, sapete, pò esce da elli, cusì ùn ci hè micca una risposta definitiva, ma pensu chì hè più travagliu in corso.

[01:08:14]

Graham Taylor, PhD

Va bè. Ebbè, andemu à vede. Una quistione, Muhammad Islam dumanda ch'ellu hà una altra quistione impurtante nantu à a stabilizazione mRNA-LNP è pudemu misurà u cuntenutu di l'acqua in LNP o ci hè qualchì analisi chì avete fattu o pudete suggerisce, pudemu riduce o eliminà u cuntenutu di l'acqua in LNP?

[01:08:40]

Dr Gaurav Sahay

Iè, ùn sò micca, eiu, sapete, hè una bella dumanda. Di novu, cum'è cusì, a struttura di LNP hè sempre cum'è l'aghju dettu per u dibattitu, sapete, ci sò documenti di Esta Zeneca induve l'mRNA è cum'è, sapete, in fondu in l'acqua è poi l'ionizabilità forma una sorta di sti tubi. Dunque, ùn sò micca sapè s'ellu sguassate tuttu u cuntenutu di l'acqua di mRNA hè una bona idea o micca perchè hè di novu cum'è solubilizatu in quellu tipu di tunnel chì hà un acqua in ellu, è hà RNA in. Allora, sapete, quantu di chì hè essenziale per una spedizione efficiente, ùn sò micca. Di novu, a struttura interna hè qualcosa chì avemu sempre capitu, nò? Cum'è avà sapemu chì u peg lipid hè in a superficia, seguitu da forsi DSPC è dopu ci hè u sangue di ionizer è u colesterolu. Allora, induve sò i sacchetti di l'acqua è sò cruciali s'ellu sguassate hè una bona idea o micca hè, sapete, ùn hè micca chjaru, ma a ghjente travaglia è facenu cum'è studii computazionali per travaglià ancu. Dunque, di novu, pensu chì sò tutte e grandi dumande è ùn sò micca sicuru d'una analisi di cumu pudemu ... chì hè una bona dumanda, duverò veramente guardà in questu, cum'è cumu pudete guardà u cuntenutu di l'acqua in l'internu. LNP à questu puntu.

[01:10:13]

Graham Taylor, PhD

E poi pensu 

[01:10:15]

Nima Tamaddoni, PhD

Oh, Hardik vene in diretta, dunque avà pudete dumandà ellu.

[01:10:18]

Graham Taylor, PhD

D'accordu, sì, Hardik.

[01:10:20]

Nima Tamaddoni, PhD

Iè, Hardik hè unu di i nostri panelisti chì si uniscenu da l'università di Montana; hà qualchì quistione, grazie.

[01:10:26]

Dr Gaurav Sahay

Ciao, Hardik!

[01:10:27]

Dr Hardik  

Grazie. Oh, grazie Nima Tamaddoni, PhD. A mo dumanda hè nantu à u sviluppu di l'ARNm LNP stabile in temperatura, chì pensate in termini di timeline chì duverà piglià o qualsiasi tipu di documenti chì avete scontru chì pari promettenti?

[01:10:44]

Dr Gaurav Sahay

Iè, pensu, sapete, documenti di Yuzu Dong, stavanu aduprendu, sò cum'è sfarenti, sapete, cum'è saccarosi è cose cusì chì sò digià in formulazioni LNP. Pensu chì questu hè un settore di ricerca attivu di novu, soprattuttu postu chì questu hà avutu tanta attenzione chì sò abbastanza sicuru, sapete, BioNTech, Pfizer, Moderna, i so scientisti di formulazione travaglianu ghjornu è notte è forsi anu digià capitu, ghjustu. ? Cum'è quandu questu hè cuminciatu è a ghjente diceva, oh, hè questu minus 80, aghju dettu cum'è, cù tantu interessu è questu esse un prublema basatu in farmacia, cummincià à vede a suluzione è poi hè diventatu ehi hè -20 è à quellu tempu cum'è. sti LNP ùn eranu micca bè carattarizati per cum'è, sapete, per Pfizer perchè l'avianu ottinutu da cum'è pensu chì Acutas è BioNTech per sapè veramente quale eranu e caratteristiche di stabilità. Allora, per de-risk it, minus -80 era una bona idea, ma pensu chì cum'è ottene più dati di stabilità, pensu chì puderianu ghjunghje à cum'è minus 20. Ma rendendu a temperatura di l'ambienti stabile chì pensu chì avaria un impattu più altu. . Pensu chì ponu ghjunghje assai rapidamente à 4 gradi cù alcuni di sti cambiamenti chì aghjunghjenu additivi diffirenti. Ma pensu chì fà vaccini per esse a temperatura di l'ambienti chì hè statu un scopu longu di a fundazione di e porte. Cunnoscu à Bob Langers è Anna Jank, cum'è ella travaglia per fà, sapete, altri tipi di vaccini di proteini chì sò stabile à a temperatura di l'ambienti.

Dunque, pensu chì questu, u timeline pensu chì hè assai più veloce per via di a pandemia, hè difficiule di predichendu a scienza. Ùn vogliu micca, sapete, esse un scientist o abbastanza umile per, sapete, per ùn dì micca chì questu succederà da questu tempu perchè a scienza vi pò dà, sapete, pò fà vi umili à un certu tempu, ma pensu. cù tante persone chì travaglianu nantu à questu, solu soprattuttu à quattru gradi, pensu chì ghjunghjeranu abbastanza rapidamente è pensu chì assai persone sò travagliendu nantu à questu, ma pensu chì avemu ancu capisce perchè a stabilità hè un prublema, nò? Hè a nanoparticella di lipidi, nò? Cume hè u LNP chì hè abbastanza inestabile? Hè u mRNA? Hè interazzione cù l'ambiente? Dunque, hè assai di chimica fisica in a mo mente chì deve esse ben capitu per risolve stu prublema è pensu chì hè assai più di un prublema più simplice di scappà di l'endosome chì hà tanta barriera biologica. Allora, stu prublema, sapete, hè un prublema farmaceutica fundamentale principale cum'è l'industria farmaceutica face questu per una vita. Allora, sò abbastanza sicuru chì veneranu cù modi, pensu chì un modu hè liofilizà, nò? Cum'è a liofilizazione di sti particeddi, puderanu ancu pruvà.

Allora, in una forma di pulveru è poi site, sapete, è poi mettemu ancu in a nostra rivista. Dunque, ci sò altri metudi per fà e cose stabili cum'è a liofilizazione è cose cusì chì puderanu ancu fà assai più veloce. Dunque, pensu chì serà più veloce di ciò chì pensemu. Ma pensu chì a porta à a temperatura di l'ambienti cusì hè qualcosa chì avarà veramente un grande impattu. Allora, se pudete vene cun formulazioni chì sò stadda à a temperatura di l'ambienti, soprattuttu per u mondu sanu induve ùn avete micca bisognu di mantene a catena di supply seria solu trasfurmazioni, è ancu per i terapii. Di novu, ciò chì succede per i vaccini è per fà megliu putenza sàviu o per rende più stabile aiuta à a terapèutica chì vene ancu in u futuru.

[01:14:40]

Dr Hardik  

Grazie, Dr Sahay.

[01:14:43]

Graham Taylor, PhD

Iè, ti ringraziu assai. Dunque, ci sò uni pochi di dumande è avemu sceltu alcune di e dumande chì u duttore Sahay puderia esse più adattatu per risponde, è ci sò parechje altre dumande bè. Sì avete una dumanda chì ùn hè micca dumandata o ùn riceve micca risposta, sapete chì l'avemu è speremu chì pudemu seguità è affruntà à una di e sessioni di discussione Q / A più tardi nantu à forse alcuni aspetti tecnichi di a preparazione di mostra. o quale hè u megliu modu per preparà mostre cose di stu tipu. Unu, andemu à vede, cusì nantu à u puntu, Yemen Zhao avia mintuatu a formulazione di liofilizazione di LNP chì avete toccu, per quessa hè una altra via pussibule per pruvà à aiutà cù a stabilità per stabilizzà i vaccini o altre droghe. Mosain Ramazan Poveru hà una bona quistione, hè u miccanisimu moleculare à a fusione di membrana endosomal LNP è stanza di geni? Allora chì sapemu di i meccanismi molecolari di a fusione o liberazione endosomale di LNP è sapete qualcosa di e fasi di lipidi lucali chì aiutanu cù quella liberazione di geni, cusì ...

[01:15:50]

Dr Gaurav Sahay

Di novu, una bella dumanda! Pensu, sapete, avemu da esse cum'è qualchi indizi di cumu succede questu, ancu, sapete, pensu chì hè assai più difficiule, soprattuttu ciò chì succede in vivo. Ma pensu, sapete, avemu avutu una rivista induve avemu pensatu chì ci sò prucessi diffirenti, nò? Cum'è a spugna di protoni era quì, cum'è a fusione era quì, ma pensu chì hè diventatu più è più chjaru chì ci hè una sorta di fusione endosomale chì succede. Ci sò documenti ancu di pocu tempu induve u cuncettu chì ci hè una fase hexagonal invertita chì succede una volta chì u lipidu ionizable interagisce cù a membrana endosomale caricata negativamente è chì provoca questa fase hexagonal invertita di un arrangiamentu chì porta à una fuga megliu. Allora, se pudete ghjunghje da quella fase lamellare à una fase esagonale invertita, una volta chì a particella sbarca nantu à una membrana endosomale in u latu luminale chì l'arrangiamentu di sorta aiuta in u prucessu di scappata, avè dettu chì pensu, sapete, sò tutti boni ipotesi per avè è avè qualchì, sapete, digià qualchì meritu biofisicu è a ghjente hà studiatu, cum'è Peter Cullis, recentemente Dan Siegert hà avutu un documentu induve basatu annantu à quella ipotesi, hà fattu assai lipidi diffirenti chì ponu aiutà à una trasfezzione di geni megliu. , possibbilmente per via di una fuga endosomale. Allora, pensu chì sò menu metudi, inizialmente a ghjente hà pensatu à a fusione di volta da una membrana endosomale chì puderia esse qualcosa. Dunque, pensu chì ci hè una fusione chì hè sicura. A fase hexagonal invertita pò esse unu di i modi di succede, ma chì sò i regulatori moleculari chì facenu, nò? Avete sta assai di galectin8, ubligatoriu nantu à una membrana endosomale.

Allora, pensu chì cù e cose cum'è ELNP, avà pudemu indicà quale sò l'altri regulatori molecolari chì aiutanu in quellu prucessu di fusione, hè solu a fase esagonale invertita o, sapete, cunsiderà cum'è lipidi ionizabili cum'è ingredientu attivu perchè, Sapete, una volta ... cusì, per l'incapsulazione per esempiu, a particella hè solu incapsulating, hè solu un eccipiente, ma una volta chì principia à interagisce cù una membrana endosomale, è poi cambia a permeabilità di a membrana per fusione, è face cose cum'è galectina per andà. up, diventa una sorta di in a mo mente un tipu attivu di un ingredientu impegnatu cù a membrana biologica è torna torna à a vostra dumanda, l'altri regulatori, per quessa, ci sò altri regulatori in a storia galactin8 hè quellu chì puderia aiutà à capisce cumu questu. u trasportu hè accadutu, ci hè cum'è un trasportatore moleculare chì diventa attivu è aiuta in stu prucessu di fusione.

Allora, pensu chì ci hè ancu assai da sapè, ma tornendu à a vostra dumanda nantu à ciò chì sò a carattarizazione di particelle, hè pensu chì hè fusione è una fase esagonale invertita, chì sò u milieu biologicu, ciò chì cambia quì, Pensu chì se cumminciamu à calculà chì ci pò darà una megliu capiscitura di cumu si passa da a perspettiva biologica è cumu si verifica a fusione perchè, cum'è assai di sti virus, anu sfarenti tippi di peptidi chì interagiscenu cù a membrana biologica in un modu. un certu modu è a mo ipotesi hè chì i LNP puderanu ancu avè caratteristiche simili è chì ponu ancu purtà à una fusione megliu. Torna una risposta longa, ma sò un omu di endocitosi per un bellu pezzu. Allora, se mi dumandate una quistione di endocitosi, uttene una risposta longa, se mi dumandate regulatori, seraghju quì.

[01:19:46]

Graham Taylor, PhD

Iè, resteremu luntanu da a guida di a FDA. Pensu chì avemu affruntatu un pocu di sti dumande eccellenti. Grazie, un bonu versamentu, Dr. Sahay, ùn pudemu micca ringrazià abbastanza, apprezzemu veramente chì avete pigliatu u tempu per sparte cun noi tutti quì, è cusì ...

[01:20:08]

Nima Tamaddoni, PhD

Iè, bè, simu veramente umili. Grazie mille à u duttore Sahay per u vostru tempu è sò sicuru chì i 400 assistenti anu piaciutu à a conversazione è dumandanu assai boni dumande. Andemu à una sessione suciale, serà aperta à tutti, è hè un tipu di pausa in fondu, andemu à vultà à una ora cù Daryush Muhammadyani da Johnson & Johnson, hà travagliatu. in Moderna prima è avà travaglia à Johnson & Johnson, hà ancu ghjucatu un rolu chjave in l'approcciu computational di sti vaccini è therapeutics, l'RNA, LNP. Allora, grazie ancu à tutti i participanti, simu veramente grati d'avè tutti voi, è questu hè un principiu di una piattaforma, una piattaforma educativa chì speremu di mantene tutti in questa cumunità. Allora, grazie.

[01:21:14]

Dr Gaurav Sahay

Grazie, questu era u mo piacè. Grazie tante. Avvedeci.

Cuntatta ci